滇黄精组织培养的步骤和注意事项(组培技术)
黄精、滇黄精和多花黄精是三种珍贵的植物,在进行种苗扩繁时,由于种植周期长、种子收集难度大、发芽率低、育苗周期长等因素的影响,可以采用组织培养技术。以下是滇黄精组织培养的具体步骤:
滇黄精组培
一、材料选择及消毒
1.材料选择:在3~4月份选择当年生、生长健壮、无病虫害的植株,以其根茎为繁殖材料。 2.消毒:用水刷洗所选材料的地下块茎,去掉叶片和根系,切下根状茎上的芽,然后浸泡5小时(26℃,每分钟112转),接着用羧苄西林钠或头孢唑林钠浸泡,再用75%乙醇漂洗30秒,用氧化汞灭菌5分钟,最后用无菌水清洗3次。
二、愈伤组织培养和芽分化
将消毒过的外植体经过切分处理后接入MS+NAA 1.5mg/L+KT 1.5mg/L培养基中约15天后即有启动痕迹。经过25天左右的培养,根茎芽周围开始冒出新芽,但其生长势较弱,有效芽较少;45天左右,新生芽的数量达到最大值,并且其生长势最强,有效芽的数目趋于稳定;而65天后,新生芽体的生长趋势明显下降,芽体也出现萎蔫现象,甚至枯死衰退。
三、滇黄精的继代增殖培养
待愈伤组织或不定芽形成后,将分化的不定芽块茎切成0.5cm³左右的小块转接至增殖培养基(MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.2mg/L)。连续继代增殖培养可达7~8代,增殖率一般为4~6倍。继代培养的培养时间为45~55天为宜。
四、滇黄精的生根苗培养
将继代增殖培养的组培材料转移至生根培养基(1/2MS+NAA 1.0mg/L+活性炭0.20g/L)中进行增殖培养,30天后就能长出根。生根率可达90%以上。以上愈伤组织、芽分化、继代培养和生根苗培养的基础培养基加入了汶糖20g/L、琼脂5g/L,pH值为5.8~6.8。培养环境温度为25℃±2℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间每天10~16小时。
五、炼苗移栽
生根45天后,在敞开的培养瓶中进行炼苗3天,并选择根长大约为2~3cm,根数多于3条的芽的植株,洗净培养基后移栽于基质(泥炭土:沙:珍珠岩=2∶2∶1)中,置于18~20℃温度下,土壤湿度保持在50%~60%,每1~2周喷施1次叶面肥。经过2个月左右,滇黄精组培苗成活率可达90%以上。
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