滇黄精组织培养的步骤和注意事项(组培技术)

黄精、滇黄精和多花黄精是三种珍贵的植物，在进行种苗扩繁时，由于种植周期长、种子收集难度大、发芽率低、育苗周期长等因素的影响，可以采用组织培养技术。以下是滇黄精组织培养的具体步骤：

滇黄精组培

一、材料选择及消毒

1．材料选择：在3～4月份选择当年生、生长健壮、无病虫害的植株，以其根茎为繁殖材料。 2．消毒：用水刷洗所选材料的地下块茎，去掉叶片和根系，切下根状茎上的芽，然后浸泡5小时（26℃，每分钟112转），接着用羧苄西林钠或头孢唑林钠浸泡，再用75%乙醇漂洗30秒，用氧化汞灭菌5分钟，最后用无菌水清洗3次。

二、愈伤组织培养和芽分化

将消毒过的外植体经过切分处理后接入MS+NAA 1.5mg/L+KT 1.5mg/L培养基中约15天后即有启动痕迹。经过25天左右的培养，根茎芽周围开始冒出新芽，但其生长势较弱，有效芽较少；45天左右，新生芽的数量达到最大值，并且其生长势最强，有效芽的数目趋于稳定；而65天后，新生芽体的生长趋势明显下降，芽体也出现萎蔫现象，甚至枯死衰退。

三、滇黄精的继代增殖培养

待愈伤组织或不定芽形成后，将分化的不定芽块茎切成0.5cm³左右的小块转接至增殖培养基（MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.2mg/L)。连续继代增殖培养可达7～8代，增殖率一般为4～6倍。继代培养的培养时间为45～55天为宜。

四、滇黄精的生根苗培养

将继代增殖培养的组培材料转移至生根培养基（1/2MS+NAA 1.0mg/L+活性炭0.20g/L）中进行增殖培养，30天后就能长出根。生根率可达90%以上。以上愈伤组织、芽分化、继代培养和生根苗培养的基础培养基加入了汶糖20g/L、琼脂5g/L，pH值为5.8～6.8。培养环境温度为25℃±2℃，光照强度为2000～3000lx，光照时间每天10～16小时。

五、炼苗移栽

生根45天后，在敞开的培养瓶中进行炼苗3天，并选择根长大约为2～3cm，根数多于3条的芽的植株，洗净培养基后移栽于基质（泥炭土：沙：珍珠岩=2∶2∶1）中，置于18～20℃温度下，土壤湿度保持在50%～60%，每1～2周喷施1次叶面肥。经过2个月左右，滇黄精组培苗成活率可达90%以上。